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细胞计数及活力测定

   

    培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。
  在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力,了解冻存和复苏的效果。
  用台盼兰染细胞,死细胞着色,活细胞不着色,从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应,也可测定细胞相对数和相对活力。
  操作步骤:
  (1)  细胞计数 
  1 将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上。
  2 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。
  3 静置3分钟。
  4 镜下观察,计算计数板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算:
  细胞数/ml4大格细胞总数/ 4×10000 
  注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团占10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。
  (2)  细胞活力
  1 将细胞悬液以0.5ml加入试管中。
  2 加入0.5ml 0.4%台盼兰染液,染色23分钟。
  3 吸取少许悬液涂于载玻片上,加上盖片。
  4 镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数,计细胞活力。
  死细胞能被台盼兰染上色,镜下可见深兰色的细胞,活细胞不被染色,镜下呈无色透明状。 活力测定可以和细胞计数合起来进行,但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。

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