细胞计数及活力测定

    培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。
　　在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。
　　用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。
　　操作步骤：
　　(1)  细胞计数 
　　1、 将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。
　　2、 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。
　　3、 静置3分钟。
　　4、 镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
　　细胞数/ml＝4大格细胞总数/ 4×10000 
　　注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10％以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
　　(2)  细胞活力
　　1、 将细胞悬液以0.5ml加入试管中。
　　2、 加入0.5ml 0.4％台盼兰染液，染色2一3分钟。
　　3、 吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。
　　4、 镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。
　　死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。 活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。